免疫組化
免疫組化（IHC），是應(yīng)用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)酶標(biāo)抗體與底物反應(yīng)顯色，從而對(duì)組織細(xì)胞內(nèi)抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)。免疫組化（IHC）具有特異性強(qiáng)、敏感度高、定位準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。
目前我司主要可以對(duì)石蠟切片、冰凍切片、細(xì)胞爬片、組織芯片進(jìn)行免疫組化檢測(cè)。
免疫組化，免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)，是一項(xiàng)利用抗原抗體反應(yīng)，通過(guò)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原，對(duì)蛋白定位，定性的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。
免疫組化主要用的是組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類，組織標(biāo)本包括石蠟切片（病理切片和組織芯片）和冰凍切片。
石蠟切片，對(duì)組織形態(tài)保存好，保存時(shí)間也長(zhǎng)，雖然對(duì)組織抗原暴露有影響，但可以抗原修復(fù)，所以石蠟切片仍然是首選的標(biāo)本制作方法。
免疫組化步驟詳解
1、在60°烤箱烤片30~60min，這一步是為了使蠟片水分蒸發(fā)和石蠟融化，好讓組織切片牢固貼在玻片上。做切片是免疫組化的前提切片子最好是找專業(yè)培訓(xùn)郭的人員切片，片子的厚薄均勻，切片的完整，無(wú)褶無(wú)刀痕。
2、脫蠟水化，依次放入二甲苯I、II、III各10min，乙醇梯度（高至低）各2min，水。然后用自來(lái)水洗一下，但不要直接對(duì)著切片沖洗。
3、抗原修復(fù)，小編用的是高壓熱修復(fù)，ph6.0的檸檬酸鹽緩沖液，一定要全部浸泡切片，等高壓鍋冒氣后5min結(jié)束，自然冷卻，溫度劇降可能引起脫片哦。3%H202避光浸泡15min。
4、用免疫組化油筆圍繞組織畫圈，接下來(lái)就能看見它的功效了。PBS洗5min*3次。PBS會(huì)被鎖在畫的圈中，不會(huì)流干，保證不干片。
免疫組化結(jié)果分析
很多時(shí)候，我們千辛萬(wàn)苦地染出了一張張漂亮的免疫組化片子。如何正確地分析，得出理想的結(jié)果。
結(jié)果分析主要有兩種方法，陽(yáng)性著色細(xì)胞計(jì)數(shù)法和評(píng)分法。
前者是在40*光鏡下，隨機(jī)10個(gè)視野下計(jì)數(shù)陽(yáng)性著色細(xì)胞；
后者則是在光學(xué)顯微鏡下按染色程度（0分陰性著色，1分淡黃色，2分淺褐色，3分深褐色）和陽(yáng)性范圍（1分0-25%，2分26-50%，3分51-75%，4分76-100%）評(píng)分，最終分?jǐn)?shù)相加。
1.對(duì)照染色
沒有對(duì)照染色的免疫組化結(jié)果是不可信的。對(duì)照一般有陽(yáng)性組織對(duì)照，陰性組織對(duì)照，陰性試劑對(duì)照，自身對(duì)照。一般來(lái)說(shuō)，有一個(gè)陽(yáng)性組織對(duì)照和一個(gè)陰性組織對(duì)照就足夠了。
2.定位
抗原表達(dá)必須在特定部位。如LCA應(yīng)定位在細(xì)胞膜上；CK應(yīng)定位在細(xì)胞漿內(nèi)；PCNA及p53蛋白應(yīng)定位在細(xì)胞核內(nèi)等等。不在抗原所在部位的陽(yáng)性著色，不能視為確切的陽(yáng)性結(jié)果。有可能是非特異性染色或者假陽(yáng)性。不能確定怎么辦？這就要用到上一段提到的對(duì)照染色了。
3.肉眼定量
因?yàn)槿藶橹饔^性比較強(qiáng)，所以只能稱作半定量。免疫組化的半定量一般就分為三級(jí)：弱（+），中（++），強(qiáng)（+++）。以綠色免疫熒光為例，則表現(xiàn)為淺綠色熒光、明顯綠色熒光和亮綠色耀眼熒光。弱（+）=1，中（++）=2，強(qiáng)（+++）=3。至少隨機(jī)觀察5-10個(gè)視野。然后根據(jù)（+）% x 1 +（++）% x 2 +（+++）% x 3計(jì)算出數(shù)值；總數(shù)值<1.0者為（+），1.0-1.5者為(++), >1.5者為(+++)。
4.圖像分析軟件
如果要進(jìn)行精確定量的話，就要用到圖像分析軟件。圖像分析軟件類型很多。
一款圖像分析軟件： Image J。NIH開發(fā)的免費(fèi)軟件。一般的免疫組化結(jié)果分析用它就綽綽有余了。現(xiàn)在已經(jīng)開發(fā)到了1.50版。網(wǎng)上可以免費(fèi)下載。
